Ricerca virologica

Ricerca virologica

Gli studi virologici sono studi progettati per isolare i virus e studiarne le proprietà e per stabilire l'associazione eziologica dei virus con determinate malattie.

Il materiale per la ricerca viene preso in base al luogo di riproduzione primaria dei virus nel corpo del paziente e dai modi del loro isolamento nell'ambiente esterno. Il materiale viene raccolto in piatti sterili, consegnato al laboratorio il più rapidamente possibile e conservato fino a quando lo studio è congelato o in ghiaccio. Prima dell'uso, il materiale di isolamento del virus viene trattato con antibiotici ( penicillina e streptomicina ) per sopprimere la microflora estranea e viene centrifugato per rimuovere le particelle più grandi.

L'isolamento del virus viene eseguito infettando con animali da laboratorio contenenti virus, embrioni di pollo, colture di tessuti. La scelta del metodo di isolamento dipende dal presunto agente patogeno della malattia. Pertanto, le colture tissutali (vedi) vengono utilizzate quando si lavora con virus che non sono patogeni per gli animali da laboratorio o quando i virus nella coltura tissutale vengono rilevati prima rispetto a quando sono infetti da animali. Gli embrioni di pollo sono infestati per isolare i patogeni dell'influenza , la parotite infettiva (nelle cavità amniotiche e allantoiche), l' ornitosi (nel sacco vitellino), il vaiolo (nel guscio corionaleanatosi).

Da animali da laboratorio, i topi bianchi sono spesso utilizzati per isolare i virus, quindi conigli, ratti, porcellini d'India, scimmie. Per gli arbovirus, l'introduzione più efficace di un materiale contenente virus nel cervello o nel midollo spinale , per i virus pneumotropici - alla mucosa delle vie respiratorie, per i virus del vaiolo e l' herpes alla cornea scarificata.

L'isolamento dei virus è più efficace nel periodo acuto della malattia. Un momento importante nello stabilire la natura virale della malattia è il risultato di studi sierologici su sieri prelevati ripetutamente dallo stesso paziente all'inizio della malattia e durante il periodo di ricognizione. La rilevazione di anticorpi contro virus isolati nel secondo siero in titolazione è 4 e più volte superiore rispetto alla prima, indicando la relazione eziologica dei virus con questa malattia.

Un metodo rapido e precoce per la rilevazione di antigeni virali è il metodo degli anticorpi fluorescenti, basato sulla fissazione specifica di anticorpi marcati con fluorocromo sulla superficie dell'antigene. L'antigene viene facilmente rilevato mediante microscopia luminescente (vedi) a causa della fluorescenza luminosa degli anticorpi adsorbiti sull'antigene. Il metodo degli anticorpi fluorescenti esamina i campioni prelevati da pazienti, sezioni istologiche di tessuti interessati, preparati da colture tissutali. Per rilevare i corpi elementari (virioni), viene utilizzata anche la microscopia elettronica (vedi). Tra gli altri metodi morfologici, vengono utilizzati quelli che rilevano inclusioni virali intracellulari in sezioni di organi e tessuti colpiti. Il rilevamento delle inclusioni indica un'infezione e in alcuni casi contribuisce alla diagnosi di una malattia virale. Per rilevare gli anticorpi virali nel sangue dei pazienti e per studiare la struttura antigenica dei virus, vengono utilizzate varie reazioni sierologiche . La reazione di neutralizzazione è utilizzata per quasi tutte le infezioni virali. Si basa sulla capacità degli anticorpi anti- siero di neutralizzare le proprietà infettive dei virus quando la miscela viene introdotta nel corpo di animali sensibili o in coltura tissutale. Per determinare l'indice di neutralizzazione, una dose costante di siero viene miscelata con diverse diluizioni dei virus e per la determinazione del titolo anticorpale, varie diluizioni di siero con una dose costante di virus. Il controllo è l'infezione di animali (o coltura di tessuti) con una miscela di virus con siero normale o con soluzione salina. La reazione di neutralizzazione è posta non solo per il rilevamento di anticorpi, ma anche per determinare il tipo e il tipo di virus.

La reazione di fissazione del complemento [ad esempio, la reazione di Borde-Gengu (vedi)] viene utilizzata per rilevare sia gli antigeni virali che gli anticorpi. Nel primo caso, si ritiene che il siero immune conosciuto e il materiale in cui si presume interagiscano la presenza di antigeni: siero, lavaggi nasofaringei, estratti di tessuti dell'organismo infetto. Nel secondo caso, un noto antigene (diagnostico) e siero del paziente o convalescente.

RSK viene utilizzato per diagnosticare malattie causate da virus di influenza, vaiolo, poliomielite , parotite , adenovirus e arbovirus.

La reazione di precipitazione in agar si basa sulla formazione di una banda di precipitazione nel sito di contatto dell'antigene con anticorpi nello strato di agar tra i pozzetti riempiti con l'antigene virale e il siero immune. La reazione viene utilizzata per studiare la struttura antigenica dei virus e per diagnosticare alcune infezioni - vaiolo, poliomielite, epatite epidemica .

La reazione di emoagglutinazione , basata sulla proprietà di molti virus, provoca l' agglutinazione (incollatura) degli eritrociti di vari animali (polli, oche, porcellini d'India) e gli esseri umani, viene utilizzata per rilevare i virus. Il siero antivirale sopprime l'attività di emoagglutinazione dei virus e questo fenomeno, chiamato reazione di inibizione dell'emoagglutinazione (RTGA), è ampiamente usato per diagnosticare l'influenza, la parotite, il vaiolo e alcune encefaliti .