Tecnologia microscopica

Tecnologia microscopica

La tecnologia microscopica è un insieme di tecniche e regole per la manipolazione e il funzionamento con un microscopio e le sue parti ausiliarie.

Quando si lavora con un microscopio, è necessario prima di tutto proteggerlo dalla contaminazione (negli intervalli tra il lavoro è coperto con un tappo di vetro o di cartone). Non è consigliabile svitare spesso le lenti: il filo viene attivato e il loro allineamento è disturbato. La parte ottica viene accuratamente pulita molte volte con un panno pulito o incontaminato di lino o cambrico, le tracce di sporco vengono rimosse con un tampone inumidito con alcool al 95% e poi pulite con un tampone asciutto. L'olio viene rimosso dalla superficie della lente con un panno morbido e asciutto e i suoi residui possono essere rimossi con xilene. La polvere viene rimossa dalla parte meccanica del dispositivo. La pulizia e la lubrificazione complesse vengono eseguite da uno specialista.

Il lavoro con i microscopi moderni richiede l'uso di un'illuminazione razionale, un'attenta scelta del sistema ottico dell'obiettivo-oculare-condensatore, così come degli obiettivi e dei vetri di copertura della qualità richiesta, un'appropriata preparazione della preparazione, l'oggetto dell'indagine. Come fonti di luce puntiforme, OI-7, OI-9, OI-18, servono illuminatori OI-19 equipaggiati con lenti per collettori. L'illuminatore è posizionato a una distanza di 30-40 cm prima del microscopio. Non illuminare troppo il campo visivo , in quanto riduce la qualità dell'immagine. Avendo stabilito l'illuminazione, regolare l'apertura angolare del condensatore, aprire completamente il diaframma di apertura e chiudere completamente il diaframma del campo (collettore), osservare un cerchio luminoso (apertura dell'apertura) nel microscopio. Quindi il diaframma di apertura viene gradualmente ridotto al punto in cui un punto senza un bordo blu o verde sarà visibile nel campo visivo. La qualità dell'immagine dipende dall'uso razionale di obiettivi e oculari. Usando diverse combinazioni di lenti e oculari, puoi ottenere diversi ingrandimenti. Tuttavia, la scelta dell'aumento desiderato dovrebbe essere determinata principalmente dall'oggetto, dagli obiettivi di ricerca e dal potere risolutivo del microscopio.

Come regola generale, le lenti a immersione (olio, acqua, glicerina) vengono utilizzate per la batterioscopia. Per ottenere una buona immagine senza l'uso di un vetro di copertura, si consiglia di utilizzare uno speciale olio per immersione, una goccia del quale viene applicata a uno striscio posizionato su un vetrino. Quando si lavora con una lente a immersione, è necessario abbassare molto attentamente il tubo, in modo da non danneggiare la lente frontale dell'obiettivo. La qualità dell'immagine dipende dallo spessore del vetrino (non più di 1,1-1,4 mm) e dal vetro di copertura (non più spesso di 0,15-0,17 mm).

Gli strumenti ausiliari per la microscopia sono: un tavolo riscaldante, un micrometro oculare, un micrometro a oggetti, un apparecchio di disegno e un micromanipolatore.

Un tavolo riscaldante è installato al posto di un tavolo. Il grado di riscaldamento è regolato dal termostato. Il farmaco su questo tavolo è impostato, come al solito stadio del microscopio.

Il micrometro dell'oculare permette di misurare gli oggetti osservati. A tale scopo, focalizzare la lente sulla scala del micrometro dell'oggetto, ciascuna delle quali è pari a 10 micron.

Un'importante sezione della tecnologia microscopica è lo schizzo dell'oggetto della ricerca. Il disegno può essere fatto visivamente o più accuratamente con l'aiuto di un dispositivo di disegno. Con il metodo visivo, il microscopio viene visualizzato con l'occhio sinistro e l'occhio destro è seguito dal movimento della matita sulla carta. Il dispositivo di disegno è montato sul tubo del microscopio. Lo specchio scarta attraverso il prisma l'immagine della carta e il disegno a matita nel piano dell'oculare dell'oculare nell'occhio, così l'osservatore vede simultaneamente l'oggetto, la carta e la punta della matita.

Il micromanipolatore consente di effettuare movimenti fini e precisi dei microtools ed eseguire alcune operazioni sulla cella nel campo del microscopio (rimozione e trapianto di nuclei, iniezione di varie sostanze, taglio di varie aree del citoplasma , ecc.). È costituito da un sistema di treppiedi dotato di viti che bloccano i micro-utensili, che garantisce il movimento di micro-utensili in tutte le direzioni.

Oggetti viventi ( batteri ) sono posti su un vetrino in una goccia del mezzo più adatto per loro (può la soluzione isotonica di cloruro di sodio) e, coperti con un vetro di copertura ( goccia schiacciata ), sono considerati in luce trasmessa in un campo chiaro o scuro. Preparati fissi e colorati di batteri sono prodotti sotto forma di strisci o stampe (vedi Colorazione di microrganismi).

Microscopia dei preparati - vedi Microscopia. Vedi anche Microscopio.

Tecnica microscopica - le regole di manipolazione e funzionamento con un microscopio e i suoi dispositivi ausiliari.

Una condizione importante per il successo della microscopia è l'installazione dell'illuminazione. Solo con un'illuminazione ottimale secondo Köhler (Fig. 1) puoi realizzare tutte le possibilità di un microscopio. Per installare l'illuminazione Kehler, è necessario disporre di un illuminatore OI-7 standard (Figura 2) o OI-19 con una micro-lampada (con una piccola spirale strettamente attorcigliata), che può essere spostata lungo l'asse dell'illuminatore. In questo caso, la luce del microlamp viene focalizzata dal collettore dell'obiettivo e, a una certa distanza dall'illuminatore, si forma un'immagine nitida della spirale della lampada. L'area dell'obiettivo è limitata a un diaframma a iride di grandezza variabile. Un'immagine nitida della spirale della lampada viene diretta dallo specchio del microscopio al diaframma chiuso del condensatore, che rappresenta il sistema di lenti a fuoco corto focalizzato, che raccoglie tutto il flusso luminoso in entrata in un'area molto piccola dell'oggetto. L'intero illuminatore viene spostato attorno al tavolo finché l'immagine della spirale della lampada copre l'intero diaframma del condensatore. Questo punto si nota guardando di fronte allo specchio piano del microscopio, nel quale si riflette il diaframma del condensatore. Se necessario, la lampada nell'illuminatore viene spostata lungo l'asse fino a quando l'immagine della spirale raggiunge il valore desiderato, dopo di che il diaframma del condensatore è completamente aperto.


Fig. 1. Rappresentazione schematica del percorso dei raggi quando si illumina la preparazione secondo il metodo Kohler: 1 - il filo della lampada; 2 - collettore; 3 - il diaframma del campo; 4 - immagine della filettatura della lampada nel piano del diaframma di apertura; Diaframma a 5 diaframmi; c - condensatore; 7 - immagine dei bordi del diaframma del campo nel piano della preparazione.
microscopio MVI-1
Fig. 2. Microscopio MVI-1 con illuminatore OI-7.

Quindi, il farmaco viene posto sul palco del microscopio e l'obiettivo con cui sta andando a lavorare è focalizzato su di esso.

Guardando l'oculare, il movimento di uno specchio piano ottiene la migliore illuminazione in queste condizioni. Quindi chiudere il diaframma dell'illuminatore fino all'arresto. Se in questo caso la sua immagine lascia il campo visivo, deve essere restituita dal movimento dello specchio. Sollevando o abbassando il condensatore, provare a rendere nitida l'immagine del diaframma dell'illuminatore. Ciò determina l'altezza ottimale del condensatore quando interagisce con questa lente (quando si lavora con lenti a piccolo ingrandimento, è necessario svitare la lente superiore del condensatore per adattarla al suo funzionamento con le capacità dell'obiettivo). Quando si cambia l'obiettivo, l'immagine dell'apertura chiusa dell'illuminatore deve essere nuovamente focalizzata sul piano focale dell'obiettivo.

Spostando lo specchio, l'immagine del diaframma dell'illuminatore viene trasferita al centro del campo visivo. Se i bordi dell'immagine sono colorati in modo non equo (un polo è bluastro, l'altro è rossastro), significa che l'asse dell'illuminatore è inclinato rispetto al piano verticale del microscopio. Guardando attraverso l'oculare, muovi l'illuminatore a mano in modo che il colore dei bordi dell'immagine diventi lo stesso lungo l'intera circonferenza. L'illuminazione del campo visivo diventa uniforme in tutta l'area. Resta da aprire il diaframma dell'illuminatore in modo che la sua immagine si adatti perfettamente al campo visivo di questo obiettivo. In questo caso il flusso luminoso verrà utilizzato completamente e non ci saranno raggi di luce in eccesso, che potrebbero causare disturbi nell'immagine. Ora, con l'aiuto di un reostato che modifica la potenza dell'illuminatore, si stabilisce un tale bagliore della lampada, in cui l'occhio non si stanca di luminosità eccessiva e scorge facilmente i più piccoli dettagli.

L'installazione dell'illuminazione Kehler è un prerequisito per un lavoro qualificato con un microscopio. La violazione dell'illuminazione corretta porta inevitabilmente alla perdita di risoluzione e contrasto, agli errori ottici, in particolare con la microfotografia e la micro-fotografia.

Ai moderni microscopi vengono forniti vari adattamenti per l'installazione automatica e semi-automatica dell'illuminazione. Il loro uso facilita l'installazione dell'illuminazione, ma non annulla il metodo di Koehler. Basato sull'illuminazione standard di Kehler, dopo aver eseguito alcune operazioni aggiuntive, viene stabilito il lavoro di tutti gli altri tipi di microscopi. Quindi, per esempio, per passare alla microscopia in campo scuro, dopo l'abituale installazione di illuminazione, sostituire il solito condensatore con un campo oscuro (senza cambiare la posizione dei restanti nodi del microscopio) e, osservandolo nell'oculare, sollevarlo lentamente fino a quando appare un campo scuro - le particelle scintillanti dell'oggetto su quasi sfondo nero. Il vetro soggetto per la microscopia in campo scuro dovrebbe avere uno spessore di 1 -1,2 mm, altrimenti il ​​condensatore non può mettere a fuoco la luce sull'oggetto.

La transizione alla microscopia a contrasto di fase è un po 'più complicata. Il condensatore del dispositivo a contrasto di fase ha nel piano focale un tamburo con un insieme di diaframmi anulari di diverse dimensioni (vedere la figura 2 in "Microscopia"). I numeri che appaiono nella finestra del tamburo quando ruotano mostrano quale obiettivo (x10, x20, x40 o x90) dovrebbe essere usato con un diaframma, il cui valore è visibile nella finestra al momento; la cifra O significa assenza di diaframma (funzionamento del condensatore nella modalità normale). In questa posizione, impostare l'illuminazione standard. L'obiettivo obiettivo viene quindi focalizzato sulla preparazione.

L'immagine, di regola, può essere vista molto male, ma è necessario raggiungere la sua messa a fuoco. Ruotare il tamburo per impostare il diaframma anulare desiderato. Invece dell'oculare inserire un microscopio ausiliario, disponibile in un set di dispositivi a contrasto di fase. Facilita la considerazione della zona in cui si forma l'immagine.

Spostando l'oculare di questo microscopio, ottengono una nitida visibilità di due anelli di diversa densità situati nella profondità del tubo del microscopio. Uno di questi è formato da una fessura anulare nel diaframma del condensatore; l'altro è una cosiddetta lastra di fase - un anello traslucido fatto di un rivestimento speciale applicato a una delle lenti dell'obiettivo. Le immagini di questi anelli, di regola, non coincidono l'una con l'altra. Spostando le viti di centraggio poste sotto il tamburo, spostare il diaframma in modo che la sua immagine coincida completamente con la piastra di fase. Successivamente, il microscopio ausiliario viene sostituito con un oculare convenzionale e viene osservata l'immagine a contrasto di fase.

Approssimativamente gli stessi metodi possono essere usati per il contrasto dell'ampiezza nei microscopi del tipo a contrasto d'ampiezza (anottrico).

Dopo aver cambiato il farmaco, è necessario verificare se le condizioni di illuminazione sono preservate, poiché lo spessore degli occhiali scorrevoli varia e il piano dell'oggetto potrebbe non coincidere con il piano di messa a fuoco del condensatore precedentemente stabilito. Per la verifica, chiudere il diaframma dell'illuminatore. Se la sua immagine con l'obiettivo focalizzato sulla nuova preparazione risulta essere sfocata, è necessario modificare l'altezza del condensatore e quindi riaprire il diaframma fino alla dimensione del campo visivo.

La microscopia è meglio fatta con un ugello binoculare; distribuisce il carico leggero su entrambi gli occhi, il che si traduce in una minore fatica a lungo termine.

Nonostante il significativo successo della microfotografia e della micro-imaging negli ultimi anni, i dispositivi di disegno rimangono molto utili quando si lavora con oggetti spessi e sfaccettati che non possono essere fotografati a causa della grande profondità. L'industria produce un dispositivo di disegno RA-4, il cui uso non causa difficoltà. L'attrezzatura per microfotografia (MFN micro-fototrasformatore, ecc.) È semplice, accessibile e comoda da maneggiare. Tuttavia, ottenere microfotografie di alta qualità richiede una grande pratica.

Dopo aver finito di lavorare con un microscopio, è necessario coprirlo dalla polvere. Se si utilizza una lente a immersione, l'olio di cedro deve essere rimosso delicatamente con un palmo pulito e pulito con tracce dalla lente frontale dell'obiettivo con un panno pulito leggermente inumidito con benzina o xilene (non è possibile inumidirlo abbondantemente, poiché queste sostanze possono sciogliere la colla che fissa la lente dell'obiettivo).

Le regole della cura del microscopio sono descritte nelle istruzioni ad esso.

La batterioscopia - uno studio sui batteri con un microscopio ottico - è ampiamente utilizzata nella pratica medica. L'esame batteriologico (vedi studio batteriologico) è sottoposto a preparati fissi colorati, così come i batteri nello stato di vita in preparazioni "appese" o gocce "schiacciate" (vedi Gancio sospeso, goccia schiacciata).

Produzione di preparati microscopici - vedi tecnica batteriologica. Studio batteriologico, ricerca virologica, tecnica istologica. A qualsiasi preparazione microscopica viene presentato un requisito generale: lo spessore del vetrino non deve superare 1,2-1,4 mm, il foglio di copertura - 0,4 mm.