Metodi di ricerca manometrica

Metodi di ricerca manometrica

Metodi di ricerca manometrica - una serie di metodi di ricerca basati sulla determinazione della pressione di un gas o di un liquido utilizzando vari sistemi di manometri. Negli studi fisiologici e nella pratica medica, i metodi manometrici di ricerca sono usati per determinare la pressione del sangue o della linfa (per via endovenosa, intracardiaca, intracranica, della pressione arteriosa). Negli studi biochimici, i metodi di ricerca manometrica vengono utilizzati per studiare il metabolismo del tessuto, determinare i gas ematici, i prodotti intermedi metabolici e l'attività dei singoli sistemi enzimatici. Allo stesso tempo, viene determinata la quantità di gas prodotta o scomparsa nel corso di una reazione in un sistema chiuso.

Determinazione dei gas nel sangue di Van-Slyka - vedi il metodo Van-Slyka.

La determinazione dei gas ematici di Barcroft viene effettuata nell'apparato Barcroft (Fig. 1), che consiste in due identici volumi e forma dei vasi, collegati a un manometro. Entrambe le navi sono riempite con la stessa quantità di miscela di reazione; il rilascio o l'assorbimento di gas viene solitamente effettuato in uno dei recipienti e la quantità di gas viene giudicata dalla differenza di pressione nel manometro. L'ossigeno viene rimosso dal sangue emolizzato con una soluzione satura di K 3 Fe (CN 6 ), diossido di carbonio - da acido tartarico. Pre-determinare la costante del dispositivo (per ciascuno dei vasi), cioè misurare il volume di gas che causa lo spostamento dei livelli nel manometro di 1 mm. Moltiplicando il valore della costante per la differenza di pressione rilevata nell'esperimento, si trova la quantità di gas nella porzione di sangue prelevata.


Fig. 1. Il dispositivo di Barcroft.

L'apparato Verzar (Fig. 2) rappresenta l'apparato Barcroft modificato: ha introdotto un manometro aggiuntivo, un ginocchio del quale, collegato al manometro principale, è stato graduato in unità volumetriche; il secondo ginocchio del calibro supplementare termina con un palloncino di gomma, la cui capacità può essere cambiata schiacciandone le pareti con un morsetto a vite. Quando si utilizza l'apparecchio Verzar, non è necessario determinare la costante dello strumento, poiché il volume del gas rilasciato viene misurato direttamente dalle letture del manometro supplementare prima e dopo il livellamento nel manometro principale, cambiando la capacità del pallone di gomma.


Fig. 2. Il dispositivo Verzara.

Lo studio dello scambio di tessuti a Warburg. La formazione o la scomparsa di un gas è giudicata dal cambiamento di pressione nel sistema (una piccola nave di vetro collegata ad un manometro) dopo che il gas è stato portato al suo volume originale. Lo studio della respirazione viene effettuato determinando l'assorbimento di ossigeno da sezioni di tessuto, larve, omogenati ed elementi strutturali della cellula, posti in soluzioni tampone. La quantità di ossigeno consumata è calcolata dalla diminuzione della pressione nel sistema. L'anidride carbonica rilasciata durante il processo di scambio viene assorbita dagli alcali (vedi l'apparato di Warburg).

La definizione di scambio di gas tissutale è ridotta a prendere in considerazione l'ossigeno consumato dal tessuto e rilasciato anidride carbonica. La determinazione dell'anidride carbonica viene effettuata in due modi: 1) l'acido carbonico, legato da alcali, viene spostato da un acido forte ed è determinato dall'aumento della pressione del gas nel sistema; 2) in due dispositivi determinano l'assorbimento di ossigeno da parte del tessuto. In un dispositivo per l'assorbimento di alcali di CO 2 viene versato nel serbatoio aggiuntivo, nell'altro non c'è alcali e l'anidride carbonica formata durante il processo di scambio viene rilasciata nello spazio del gas. Ciò compensa parzialmente la diminuzione della pressione nel sistema dovuta all'assorbimento di ossigeno. La differenza di pressione in entrambi gli strumenti calcola la quantità di anidride carbonica rilasciata. Il secondo metodo è meno preciso, ma più semplice e adatto nella maggior parte dei casi di ricerca.

Il metodo Warburg può essere utilizzato per studiare qualsiasi sistema enzimatico che catalizzi una reazione, direttamente o indirettamente associata alla formazione o all'assorbimento di gas.

La determinazione dei prodotti intermedi di scambio tissutale con il metodo Warburg è possibile utilizzando varie reazioni enzimatiche o chimiche che portano alla formazione o all'assorbimento di gas (solitamente CO 2 o O 2 ) in quantità equivalenti alla quantità della sostanza in esame (determinazione di ambra, piruvico, α-ketoglyutrate, glutamina, fumarico acidi, xantina, ipoxantina, un numero di aminoacidi L). Allo stato attuale, i metodi manometrici per lo studio degli intermedi del metabolismo dei tessuti sono sempre più sostituiti da metodi specifici di analisi cromatografica, che richiedono meno tempo (vedi Cromatografia).